การศึกษาคุณสมบัติทางอณูชีววิทยาของ Acinetobacter baumannii bacteriophage ABP-01

Abstract

          การระบาดของเชื้อ multidrug resistant- Acinetobacter baumannii (MDR-AB) กลายเปนปญหาสําคัญทางดานสุขภาพทั่วโลก เมื่อมีการอุบัติของ MDR-AB จึงจําเปนตองมีการศึกษาหาทางเลือกในการรักษา ที่นอกเหนือจากการใชยาตานจุลชีพ แบคเทอริโอเฟจเปนไวรัสที่สามารถติดเชื้อและทําลายเซลลแบคทีเรียดื้อยา จึงทําใหคณะผูวิจัยสนใจการประยุกตใชแบคเทอริ-โอเฟจในรูปแบบไวรัสบําบัด (bacteriophage (phage) therapy) ซึ่งจากการศึกษากอนหนานี้ไดทําการแยกแบคเทอริโอเฟจ ที่จําเพาะตอเชื้อ A. baumannii สายพันธุ ØABP-01 จากบอบําบัดน้ำเสีย ดังนั้นในการศึกษาครั้งนี้จึงมีวัตถุประสงคเพื่อศึกษาคุณสมบัติทางอณูชีววิทยาของ ØABP-01 จากการวิเคราะหดวยเทคนิค pulsed field gel electrophoresis พบวาจีโนมิกของ ØABP-01 มีขนาดประมาณ 35 kb และจีโนมิกดีเอ็นเอถูกยอยไดดวย DNaseI ทำให้ทราบว่าจีโนมิกเป็นดีเอ็นเอสายคู การวิเคราะหโปรตีนดวยเทคนิค SDS - polyacrylamide gel electrophoresis พบวามีแถบโปรตีนหลักๆ อยูหนึ่งแถบซึ่งมีมวลโมเลกุลประมาณ 28kDa และแถบโปรตีนอื่นๆ ซึ่งมีมวลโมเลกุลไลเรียงตั้งแต 20 ถึง 97kDa จีโนมของ ØABP-01 ถูกตัดไดดวยเอ็นไซมตัดจําเพาะ 8 ชนิด จากทั้งหมด 11 ชนิดที่ใชในการศึกษา คือ BamHI, EcoRI, HindIII, EcoRV, BglII, HpaII, MluI และ SphI สวนการวิเคราะหลําดับเบสบางสวนของจีโนมิกแบคเทอริโอเฟจ ØABP-01 จากการสราง genomic library พบวาลําดับเบสบางสวนของ ØABP-01 มีความคลายคลึงกับ Acinetobacter phage phiAB1, Acinetobacter phage Abp1 และ Acinetobacter phage AB3 เปนตน ผลจากการศึกษานี้สามารถใชเปนขอมูลเบื้องตน ในการนํา ØABP-01 ไปพัฒนาในรูปแบบไวรัสบําบัดเพื่อใชควบคุมการติดเชื้อ MDR-AB            Multidrug resistant-Acinetobacter baumannii (MDR-AB) has become a worldwide health problem. The emergence of MDR-AB requires the exploration of alternative antibacterial therapy. Bacteriophages (phages) - viruses of bacteria - can kill antibiotic-resistant bacteria, which led our group to study the phage for phage therapy.A. baumannii bacteriophage, ØABP-01 was isolated from waste water treatment plants. In this study, we examined the molecular characteristics of the bacteriophage ØABP-01. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) analysis revealed that phage DNA ØABP-01 have genome sizes of approximately 35 kb. The ØABP-01 genome was digested with DNaseI and revealed that the genome was double stranded DNA. Protein analysis using SDS - polyacrylamide gel electrophoresis revealed 1 major protein band of approximately 28 kDa and many minor protein bands with molecular weight ranging from 20 - 97 kDa. Restriction analysis of the ØABP-01 DNA indicated that the DNA was cut by only 8 of the 11 used enzymes, namely BamHI, EcoRI, HindIII, EcoRV, BglII, HpaII, MluI and SphI. Partial sequence of the ØABP-01 genome reveals sequence similarity to Acinetobacter phage phiAB1, Acinetobacter phage Abp1 and Acinetobacter phage AB3. Results from this study can be used as a preliminarydata for developing ØABP-01 as a phage therapy to control MDR-AB infection