การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อไซโตโครม P4501A (CYP1A) ในปลากะพงขาว (Lates calcarifer Bloch) ที่ได้รับสารเบนโซ[เอ]ไพรีน

Abstract

          การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อไซโตโครม P4501A (CYP1A) ของปลากะพงขาว (Lates calcarifer Bloch) ที่ได้รับสารเบนโซ[เอ]ไพรีน  โดยการฉีดกระตุ้นหนูขาวด้วย CYP1A จากตับปลากะพงขาวสกัดจำนวน 4 ครั้ง จากนั้นนำม้ามหนูที่ตอบสนองต่อแอนติเจนมาหลอมกับ myelomas เพื่อผลิตเซลล์ลูกผสม  คัดเลือกโคลนที่มีคุณสมบัติจำเพาะต่อ CYP1A จากตับปลากะพงขาวสกัด ที่มีน้ำหนักโมเลกุล 56 และ 74 กิโลดาลตัน โดยเทคนิค dot blot และ western blot พบโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อ CYP1A จำนวน 3 โคลน  ได้แก่  MAb- sea bass CYP1A 1.4-3D,  2.3-4G-6E  และ 155-4D  ที่มีไอโซไทป์ เป็น IgG1, IgG1 และ IgM  ตามลำดับ โมโนโคลนอลที่ผลิตได้นี้จัดได้เป็น 2 กลุ่มตามความจำเพาะของ CYP1A ในรูปแบบเสียสภาพ (denatured) และรูปแบบไม่เสียสภาพ (native form)  ได้แก่  กลุ่มที่ 1  จำเพาะต่อ CYP1A ในรูปแบบเสียสภาพเท่านั้น   มี 2 โคลน ได้แก่ MAb-sea bass CYP1A 1.4-3D  และ  2.3-4G-6E  และ  กลุ่มที่ 2  จำเพาะต่อ CYP1A ทั้งในรูปแบบเสียสภาพ และรูปแบบไม่เสียสภาพ มี 1 โคลน  ได้แก่ MAb-sea bass CYP1A 155-4D   ซึ่งแอนติบอดีที่ผลิตได้นี้สามารถนำไปใช้ตรวจสอบ CYP1A ได้ด้วยเทคนิค dot blot, western blot และ immunohistochemistry หรือพัฒนาเทคนิค ELISA ได้ต่อไปนอกจากนี้ พบว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ผลิตได้ทั้ง 3 โคลนนี้มีสมบัติในการเกิดปฏิกิริยาข้ามกลุ่มได้กับปลาทะเลชนิดต่าง ๆ  ปลาน้ำกร่อย และปลาน้ำจืดบางชนิดได้          Monoclonal antibodies specific to cytochrome P4501A of Asian sea bass (Lates calcarifer Bloch) exposed to benzo[a]pyrene were generated from a mouse immunized with fish liver cytochrome P4501A extracts. The spleen was fused with myelomas to provide hybridomas. Hybridomas were screened by dot blot and western blot against Asian sea bass CYP1A extracts. Three clones of monoclonal antibodies (MAb-sea bass CYP1A1.4-3D, 2.3-4G-6E and 155-4D) specific to Asian sea bass CYP1A (54 and 76 kDa) were obtained and the isotyping were IgG1, IgG1 and IgM, respectively. They were divided into 2 groups according to their specific binding to denatured and native form of CYP1A. The first group of antibodies (1.4-3D, 2.3-4G-6E) recognized only denatured form and the second group (155-4D) recognized both denatured and native form of CYP1A. The monoclonal antibodies can use for CYP1A detection by antibody techniques such as dot blot, western blot and immunohistochemistry or develops for ELISA. In addition, all clones of monoclonal antibodies were cross-reacted with liver cytochrome P4501A from some marine, brackish or freshwater fishes.