การพัฒนาอาหารเลี้ยงเซลล์กึ่งแข็งกึ่งเหลวเพื่อใช้สำหรับการโคลนและคัดแยกเซลล์ไฮบริโดมา

Abstract

          เทคนิคการสร้างเซลล์ลูกผสมไฮบริโดมา (hybridoma technology) เป็นกระบวนการสำคัญสำหรับการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี การคัดแยกเซลล์ไฮบริโดมาทำได้โดยวิธีการ limiting dilution แต่วิธีการ limiting dilution มีข้อจำกัดหลายประการ เช่น กระบวนการที่ยุ่งยาก และต้องการบุคลากรที่มีความชำนาญสูง ในปัจจุบันมีวิธีการที่ง่าย สะดวก รวดเร็วกว่าการทำ limiting dilution คือ วิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์ในอาหารกึ่งแข็งกึ่งเหลว อย่างไรก็ตามอาหารเลี้ยงเซลล์กึ่งแข็งกึ่งเหลวโดยสารเมทิลเซลลูโลส (methylcellulose) ที่จำหน่ายมีราคาที่ค่อนข้างสูง นอกจากนี้การทดลองพบว่าการใช้เมทิลเซลลูโลสเพียงอย่างเดียวไม่สามารถทำให้เซลล์ไฮบริโดมาเจริญเป็น โคโลนี 3 มิติ (3D) ได้ แสดงให้เห็นว่าต้องมีองค์ประกอบอื่น ๆ ในอาหารเลี้ยงเซลล์ที่จำเป็นและไม่ได้เปิดเผย ในการศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาอาหารเลี้ยงเซลล์กึ่งแข็งกึ่งเหลวโดยอาศัยเมทิลเซลลูโลส, คอลลาเจน ชนิด I และเจลาติน ที่เหมาะสมสำหรับช่วยในการเจริญเป็นโคโลนี 3 มิติ ของเซลล์ไฮบริโดมา สูตรที่ดีที่สุดของอาหารเลี้ยงเซลล์กึ่งแข็งกึ่งเหลวที่ช่วยให้เซลล์สามารถเจริญและรวมกลุ่มเป็นโคโลนี 3 มิติ คือ อาหารที่ประกอบด้วย 1.5% เมทิลเซลลูโลส, 0.25% เจลาติน และ 1% คอลลาเจน ในอาหารเลี้ยงเซลล์ DMEM ที่เติม 10% fetal bovine serum            Establishment of the hybridoma cell line is an important step for monoclonal antibody production. The screenings of a candidate hybridoma cell clone by limiting dilution is a laborious method and require highly skilled personnel. Currently, a method of easier, faster and more convenient than limiting dilution is cultured in semi-solid culture media was developed. Although, the methylcellulose based semi-solid media kit have available, the culture media kit is very expensive. Moreover, we found that using media based methylcellulose alone unable to generate a 3D colony of the hybridoma cell suggests that there must be other substances in media that are not disclose. In this study, we aimed to develop in-house semi-solid based methylcellulose for generating of 3D colony of the hybridoma cell. The various viscosity substances such as cellulose, methylcellulose, type I collagen and gelatin is used to determine the optimal combination and proportion for semi-solid media to generate 3D colony of the hybridoma cell. The best recipe of the semi-solid media that allow hybridoma cell survival, proliferate and form 3D colonies that remain physically separated from other colonies was 1.5 % methylcellulose, 0.25% gelatin, 1% collagen, in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum.