อิทธิพลของสารควบคุมการเจริญเติบโตและไคโตซานต่อการขยายพันธุ์หยาดน้ำค้างนิวซีแลนด์ (Drosera adelae F.Muell.) ในสภาพหลอดทดลอง
The Influence of Plant Growth Regulators and Chitosan on Drosera adelae F.Muell. In Vitro Condition
Keywords:
ไคโตซาน , หลอดทดลอง , สารควบคุมการเจริญเติบโต , หยาดน้ำค้างนิวซีแลนด์Abstract
งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาอิทธิพลของสารควบคุมการเจริญเติบโตและไคโตซานที่มีต่อการขยายพันธุ์ของหยาดน้ำค้างนิวซีแลนด์ (Drosera adelae F.Muell.) ในสภาพหลอดทดลอง เริ่มจากการนำชิ้นส่วนใบขนาด 0.5×0.5 ตารางเซนติเมตรของต้นกล้าหยาดน้ำค้างนิวซีแลนด์ที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่ออายุ 3 เดือน มาเพาะเลี้ยงบนอาหารวุ้นสูตร ½ MS (Murashige and Skoog, 1962) ที่เติม kinetin ความเข้มข้น 0 0.1 และ 0.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ 2, 4- D ความเข้มข้น 1 3 และ 5 มิลลิกรัมต่อลิตร เป็นเวลา 5 สัปดาห์ พบว่า สูตรอาหาร ½ MS ที่เติม kinetin 0.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ 2,4-D 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร สามารถชักนำให้เกิดแคลลัสได้ดีที่สุด 100% โดยแคลลัสที่เกิดขึ้น มีขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางเฉลี่ย 15.60 มิลลิเมตร และน้ำหนักสดของแคลลัสมากที่สุด 0.36 กรัม ซึ่งแคลลัสที่เกิดขึ้น มีลักษณะเกาะตัวกันแน่น (compact callus) เมื่อนำชิ้นส่วนแคลลัสไปเพาะเลี้ยงบนอาหารวุ้นสูตร ½ MS ที่เติม kinetin ความเข้มข้น 0 0.2 0.4 0.6 0.8 และ 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร เป็นเวลา 7 สัปดาห์ พบว่า อาหารสูตร ½ MS ที่เติม kinetin 0.4 มิลลิกรัมต่อลิตร สามารถชักนำให้เกิดยอดได้ดีที่สุด โดยมีจำนวนยอดเฉลี่ย 20.00 ยอดต่อชิ้นเนื้อเยื่อ ความยาวยอดเฉลี่ย 1.30 เซนติเมตร จำนวนใบเฉลี่ย 4.80 ใบต่อยอดและความยาวใบเฉลี่ย 1.90 เซนติเมตร สำหรับการชักนำให้เกิดรากโดยนำชิ้นส่วนยอดมาเพาะเลี้ยงต่อบนอาหารวุ้นสูตร ½ MS ที่เติม NAA ความเข้มข้น 0 0.25 0.50 0.75 และ 1.0 มิลลิกรัมต่อลิตร เป็นเวลา 7 สัปดาห์ พบว่าอาหารสูตร ½ MS ที่เติม NAA 0.75 มิลลิกรัมต่อลิตร สามารถชักนำให้เกิดรากได้ดีที่สุด โดยมีจำนวนรากเฉลี่ยมากที่สุด 15.80 รากต่อชิ้นเนื้อเยื่อ ขณะที่การชักนำให้เกิดรากโดยการเพาะเลี้ยงชิ้นส่วนแคลลัสบนอาหารวุ้นสูตร ½ MS ที่เติมไคโตซาน ความเข้มข้น 0 0.2 0.4 0.6 0.8 และ 1.0 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 5 สัปดาห์ พบว่า อาหารสูตร ½ MS ที่เติมไคโตซาน 0.8 เปอร์เซ็นต์ สามารถชักนำแคลลัสให้เกิดรากได้ดีที่สุด 100% และให้จำนวนรากเฉลี่ยมากที่สุด 13.00 รากต่อชิ้นเนื้อเยื่อ The objective of this research was to investigate the influence of plant growth regulators and chitosan on micro-propagation of New Zealand sundew (Drosera adelae F. Muell.). The 0.5 × 0.5 cm2 leaf explants of New Zealand sundew seedlings from 3-month-old were cultured on ½ MS (Murashige and Skoog, 1962) agar media with kinetin at concentrations of 0 0.1 and 0.2. mg/l together with 2, 4- D at 1, 3 and 5 mg/l concentrations for 5 weeks. From the results, it was found that leaf explants cultured on ½ MS agar media containing 0.2 mg/l kinetin with 1.0 mg/l 2, 4-D could induce compact callus induction 100% with average diameter of 15.60 mm and the maximum fresh weight of 0.36 g calluses. Then, the callus was cultured on ½ MS agar media containing with kinetin at the concentration of 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 and 1.0 mg/l for 7 weeks. It was found that ½ MS media containing 0.4 mg/l kinetin could induce shoot well with an average shoot number 20.00 shoot/explant, average shoot height 1.30 centimeters, average number of leaves 4.80 per shoot and the average leaf length 1.90 centimeters. For root induction, the shoot explant was cultured on ½ MS media containing NAA at the concentration of 0, 0.25, 0.50, 0.75 and 1.0 mg/l for 7 weeks. From the result, it was found that ½ MS media containing 0.75 mg/l NAA promoted the induction of root well with the average root number 15.80 root/shoot. While the cultivation of callus on ½ MS media containing chitosan at 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 and 1.0 % v/v for 5 weeks, it was found that ½ MS agar media containing 0.8 % v/v chitosan could induce callus 100% and gave the average highest root number of 13.00 root/shoot.References
Borjian, L. & Arak, H. (2013). A study on the effect of different concentration of plant hormones (BAP, NAA, 2, 4-D and Kinetin) on callus induction in Brassica napus. Intl. Res. J. Appl. Basic. Sci,5, 519-521.
Chaowanikhit, A. (2011). Extraction and analysis methods of anthocyanin. Journal of Srinakharinwirot University (Science and Technology),3 (6), 26-36. (in Thai)
Chuanphung, O. (2004). Effects of NAA and BA on the growth of sundews in aseptic condition and plumbagin accumulation. Special Problems of Bachelor Degree, Agricultural Biotechnology, Faculty of Agriculture. Kasetsart University. (in Thai)
Hema, B., Bhupendra, S., Saleem, T.S.M. & Gauthaman, K. (2009). Anticonvulsant effect of Drosera burmannii Vahl. Int. J. Appl. Res. Nat. Prod, 2(3), 1-4
Iamkheng, S., & Nusawat, S. (2012). Effect of chitosan on the growth of Dendrobium moschatum (Buch.-Ham.) Sw. in aseptic conditions. In the national academic conference Kasetsart University 9th Kamphaeng Saen Campus (Page 2206–2212). Nakhon Pathom: Kasetsart University. (in Thai)
Intachoti, W. (2010). Effect of nutrient concentration on growth of Drosera paradoxa in aseptic conditions. Special Problems of Bachelor Degree, Department of Horticulture, Faculty of Agriculture. Kasetsart University. (in Thai)
Jayaram, K. & Prasad, M.N.V. (2007). Rapid in vitro multiplication of Drosera indica L.: a vulnerable, medicinally important insectivorous plant. Plant Biotechnol Rep, 1(2), 79-84.
Kamarainen, T., Uusitalo, J., Jalonen, J., Laine, K. & Hohtola, K. (2003). Regional and habitat difference in 7-methyljuglone content of Finnish Drosera rotundifolia. Phytochemistry,63, 309-314.
Kanfade, H., Rudra, J., Bhowal M. & Upadhyay, A. (2011). In-vitro callus induction and shoot regeneration in Boerhaavia diffusa L. Annals of Biological Research, 2 (1), 142-148.
Krongtam, R. & Junkasiraporn, S. (2019). In vitro Plant Regeneration and Callus Induction from Leaf Explants of Sundews (Drosera spathulata Labill. and Drosera adelae F. Muell.). Burapha Science Journal, 24(3), 1205-1219.
Lopez-Moya, F., Escudero, N., Zavala-Gonzalez E, A., Esteve-Blázquez, A.M., Alabadì, D. & Lopez-Llorca, L.V. (2017). Induction of auxin biosynthesis and WOX5 repression mediate changes in root development in Arabidopsis exposed to chitosan. Scientific Report, 7, 1-14.
Miyawaki, K., Matsumoto M.K. & Kakimoto, T. (2004). Expression of cytokinin biosynthetic isopentenyltransferase genes in Arabidopsis: tissue specificity and regulation by auxin, cytokinin, and nitrate. The Plant Journal, 37(1), 128-138.
Murashige, T. & Skoog, F. (1962). A Revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue cultures. Physiology Plant, 15, 473-497.
Prasetsongsakul, S. (2012). The use of chitosan in plant tissue culture. Journal of Yala Rajabhat University,7(2), 125-134. (in Thai)
Raju, A. & Christina, A.J.M. (2013). Drosera burmannii Vahl: antioxidant potential in Dalton’s ascites lymphoma (DAL) bearing mice. J. Med. Plants. Stud, 1(4), 152-159.
Sachs, T. (1991). Pattern Formation in Plant Tissue. Cambridge University Press, Jerusalem. 234 pp.
Saengdanuch, P., & Dovanvee, W. (2008). Carnivorous plant insectivorous plant. Bangkok: Home and garden. (in Thai)
Samala, X., Junseedum, H., & Sae Han, O. (2015). Effect of colchicine on morphology of the sundew in vitro. Journal of Plant Science,1, 24-28. (in Thai)
Supinrat, S., & Supinrat, I. (2014). Effect of IBA and NAA on root induction of Rhynchostylis gigantea (Lindl.) Ridl. Seedling in aseptic conditions. Journal of Science and Technology, 22 (4), 507-514. (in Thai)
Thananchai, J., Thanapornphonphong, S., & Weianasin, S. (2013). Effect of 2,4-D and kinetin on embryogenic callus formation in white jasmine rice 105. Agricultural Journal, 29 (2), 177-185. (in Thai)
Thawirojanakarn, S., Kongthon, K., Thongyai, K., & Samala, X. (2018). Plant propagation of Sundew (Drosera burmannii Vahl.) under aseptic conditions. Journal of Plant Science Songkhla Nakarin, 5(3), 18-26. (in Thai)
Wagner, H., Baldt, S. & Zgainski, E.M. (1984). Plant drug analysis. Springer, Berlin, Heidelberg, New York.
Wisetsuwan, R. (1999). Plant tissue culture techniques. In The Training Documentation Basic Tissue Culture Techniques (Page 1-10). Nakhon Pathom: Center Printing House National Agricultural Promotion and Training. (in Thai)
Yanthan, J.S., Kehie, M., Kumaria, S. & Tandon, P. (2017). In vitro regeneration of Drosera burmannii Vahl.: a carnivorous plant of northeat India. Biotech,7, 124-133.
Yu, J., Liu, W., Liu, J., Qin, P. & Xu, L. (2017). Auxin Control of Root Organogenesis from Callus in Tissue Culture. Front. Plant Sci, 8, 1-4.