การหาปริมาณรีบาวดิโอไซด์ เอ และสตีวิโอไซด์ในตัวอย่างเครื่องดื่มและหญ้าหวาน โดยใช้ไฮเพอร์ฟอร์มานซ์ ลิควิดโครมาโทกราฟ

Abstract

          งานวิจัยนี้ได้ศึกษาสภาวะที่เหมาะสมสำหรับหาปริมาณรีบาวดิโอไซด์ เอ และสตีวิโอไซด์ในตัวอย่างเครื่องดื่ม และหญ้าหวาน โดยเทคนิคไฮเพอร์ฟอร์มานซ์ลิควิดโครมาโทกราฟีร่วมกับตัวตรวจวัดไดโอดอาเรย์ คอลัมน์ที่ใช้ในการวิเคราะห์คือ Luna C18 ความยาวคอลัมน์ 250 มิลลิเมตร เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 4.6 มิลลิเมตรและขนาดอนุภาคที่บรรจุในคอลัมน์ 5 ไมโครเมตร ความยาวคลื่นตรวจวัดคือ 210 นาโนเมตร จากการศึกษาพบว่าองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ที่เหมาะสมคือ อะซิโตไนไตรล์และน้ำ (พีเอช 3.5) ที่อัตราส่วน 35:65 โดยปริมาตร อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่คือ 0.60 มิลลิลิตรต่อนาที ภายใต้สภาวะที่เหมาะสม ใช้เวลาในการวิเคราะห์ประมาณ 8 นาที ขีดจำกัดการตรวจวัดของรีบาวดิโอไซด์เอ และสตีวิโอไซด์คือ 0.03 มิลลิกรัมต่อลิตรและขีดจำกัดการวิเคราะห์ปริมาณของรีบาว ดิโอไซด์ เอ และสตีวิโอไซด์คือ 0.10 มิลลิกรัมต่อลิตร ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R 2 ) ของกราฟมาตรฐาน (0.01 ถึง 5.00 มิลลิกรัมต่อลิตร) ของรีบาวดิโอไซด์ เอ และสตีวิโอไซด์คือ 0.9990 และ 0.9998 ตามลำดับ ความเที่ยงจากการวิเคราะห์ภายในวันในเทอมของรีเทนชันไทม์และพื้นที่พีกของรีบาวดิโอไซด์ เอ และสตีวิโอไซด์ มีร้อยละค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์อยู่ในช่วง 0.17-2.36 และ 0.10-2.04 ตามลำดับ และความเที่ยงระหว่างวันในเทอมของรีเทนชันไทม์และพื้นที่พีกของรีบาวดิโอไซด์ เอ และสตีวิโอไซด์มีร้อยละค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์อยู่ในช่วง 0.07-3.99 และ 0.11-6.94 ตามลำดับ ความแม่นในเทอมของ ร้อยละการกลับคืนของสารที่สนใจทั้งสองอยู่ในช่วง 92.0-101.3 วิธีที่นำเสนอนี้สามารถประยุกต์ใช้กับการหาปริมาณรีบาวดิโอไซด์ เอ และสตีวิโอไซด์ในตัวอย่างเครื่องดื่มและหญ้าหวานได้           The optimized conditions for the determination of two steviol glycosides, namely rebaudioside A and stevioside in beverage and stevia samples by using high-performance liquid chromatography coupled with diode array detector was studied. Analytical column was Luna C18 (4.6 mm x 250 mm, 5 micrometer). Both analytes were detected at 210 nm. It was found that the optimized mobile phase comprised acetonitrile and water (pH 3.5) in ratio of 35:65 (%v/v). The flow rate of mobile phase was 0.60 mL/min. Under these optimized conditions, analysis time was about 8 min. The limits of detection were 0.03 mg/L for rebaudioside A and stevioside, and the limits of quantitation were 0.10 mg/L for rebaudioside A and stevioside. Correlation coefficients of calibration curves from 0.01 to 5.00 mg/L were 0.9990 for rebaudioside A, and 0.9998 for stevioside. Intra-day precisions in terms of percent relative standard deviation of retention times and peak areas were 0.17-2.36 for rebaudioside A, and 00.10-2.04 for stevioside. Inter-day precisions in terms of percent relative standard deviation of retention times and peak areas were 0.07-3.99 for rebaudioside A, and 0.11-6.94 for stevioside. Accuracy of the purposed methods for rebaudioside A and stevioside in terms of percent recovery was in the range 92.0-101.3. The proposed method could be applied to determine rebaudioside A and stevioside in beverage and stevia samples.