การพัฒนาอุปกรณ์แบบกระดาษเพื่อการวิเคราะห์ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระแบบหลายวิธี

Abstract

          งานวิจัยนี้ได้พัฒนาอุปกรณ์ตรวจวัดแบบกระดาษสำหรับการวิเคราะห์ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระหลายๆ วิธีพร้อมกันซึ่งได้แก่ วิธีcupric reducing antioxidant capacity (CUPRAC), วิธี 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH) และวิธี 2,2¢-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) radical cation (ABTS) อุปกรณ์ประกอบด้วยบริเวณใส่ตัวอย่างตรงกลางเชื่อมต่อกับบริเวณตรวจวัดทั้งสี่ โดยมีสามบริเวณสำหรับตรวจวัดฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสามวิธี และอีกหนึ่งบริเวณเป็นการตรวจวัดแบลงค์ตัวอย่าง การวิเคราะห์ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระทำโดยหยดสารละลายตัวอย่างบริเวณใส่ตัวอย่างเพื่อให้ไหลไปทำปฏิกิริยากับรีเอเจนท์ของแต่ละวิธีซึ่งได้มีการบรรจุไว้แล้วบนบริเวณตรวจวัดทำให้มีสีที่เปลี่ยนไปซึ่งสามารถวัดได้ด้วยโปรแกรมคอมพิวเตอร์อิมเมจเจ (Image J) จากการวิเคราะห์สารต้านอนุมูลอิสระโดยใช้กรดแกลลิกเป็นสารมาตรฐานด้วยวิธี CUPRAC วิธี DPPH และวิธี ABTS พบว่าให้ช่วงความเป็นเส้นตรงที่ 1-6 mM 20-150µM และ 3-13 mM ตามลำดับ ความสามารถในการทำซ้ำจากการวิเคราะห์ซ้ำที่ความเข้มข้นในช่วงความเป็นเส้นตรงเท่ากับ 0.70-1.61% 0.91-4.04% และ 1.39-4.91% ตามลำดับ (n=5) และขีดจำกัดในการตรวจวัดเท่ากับ 1 mM 1.10µM และ 1.30 mM ตามลำดับ จากผลการทดลองเบื้องต้นชี้ให้เห็นว่า อุปกรณ์ตรวจวัดแบบกระดาษสามารถวิเคราะห์ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระได้หลายวิธีพร้อมๆ กันประหยัดเวลาในการวิเคราะห์อุปกรณ์มีราคาถูก ใช้รีเอเจนท์น้อย มีแนวโน้มสามารถวิเคราะห์ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในตัวอย่างจริงได้           This work developed a paper-based device for simultaneous determination of multiple antioxidant activity assays including the cupric reducing antioxidant capacity (CUPRAC) assay, the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH) assay, and 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) radical cation (ABTS) assay. The device composed of a central sample zone connected to four detection zones to accommodate three antioxidant assays and a sample blank measurement. Antioxidant activity analysis was achieved by dropping the samples onto the sample zone to flow to the detection zones containing the stored reagents for each antioxidant assay making the change in color that was measured using image J software. The analysis of gallic acid antioxidant standard with CUPRAC, ABTS, and DPPH assay gave the calibration curve in the linear ranges of 1-6 mM, 20-150 µM, and 3-13 mM, respectively, the relative standard deviation from the repetitive analysis of gallic acid at the concentrations in the linear range are 0.70-1.61%, 0.91-4.04% and 1.39-4.91% (n=5), respectively, and a limit of detection of 1 mM 1.10 µM and 1.30 mM, respectively. These preliminary results indicated that the developed paper-based device provided for the analysis of multiple antioxidant assays at the same time with low analysis time and cost, low reagent consumption and is promising to use for antioxidant activity in real samples.